Cara Membuat Larutan Stok

Dalam membuat medium kultur jaringan, biasanya menimbang setiap bahan kimia yang terdapat pada resep medium dasar. Langkah ini dianggap kurang praktis karena membutuhkan waktu lama dan mengurangi ketepatan. Kadang timbangan yang akan digunakan untuk menimbang bahan kimia dalam jumlah kecil tidak tersedia. Kendala ini dapat diatasi dengan cara membuat larutan stok terlebih dahulu.

Larutan stok dapat digunakan untuk 40, 50, bahkan 100 liter medium. Larutan stok dalam bentuk cairan dapat disimpan di dalam almari es. Pembuatan larutan stok harus dilakukan dengan teliti, karena larutan stok yang terlalu pekat akan mengalami pengendapan di dalam almari es. Jika terjadi pengendapan, maka sebelum digunakan larutan stok ini harus dipanaskan terlebih dahulu. Larutan stok yang sudah terkontaminasi tidak boleh digunakan lagi. Sebaiknya dalam membuat larutan stok ini jumlahnya tidak terlalu banyak dan faktor kebersihan tempat penyimpanan harus benar-benar dijaga agar tidak mudah terkontaminasi.

Cara Pembuatan Larutan Stok

Cara pembuatan larutan stok yang akan diuraikan pada artikel ini yaitu pembuatan larutan stok pada medium MS (Murashige dan Skoog ). Medium MS ini yang biasanya dibuat di laboratorium kultur jaringan karena medium MS dapat digunakan hampir untuk semua macam tanaman.

Di bawah ini akan dibuat larutan stok dengan memperbesar konsentrasi, tujuannya yaitu supaya dalam penimbangan bahan kimia tidak mengalami kesulitan karena bahan kimia yang perlu ditimbang sangat kecil.

A. Larutan Stok A, 1 Liter ( 50 x konsentrasi )

• Timbang Amonium Nitrat ( NH4NO3 ) 83,50 gram, masukkan ke dalam gelas piala dan tambahkan aquadest kira-kira700 ml. Aduk sampai larut.
• Pindahkan larutan tersebut ke dalam labu takar 1 liter dan tambahkan aquadest sampai tanda batas. Gojog hingga homogen.
• Larutan yang sudah jadi dipindahkan ke dalam botol reagen, tutup rapat dan beri label Stok A.
• Larutan ini mengandung 83,50 mg/ml NH4NO3 
• Untuk membuat 1 liter medium MS diperlukan 20 ml stok A.

B. Larutan Stok B, 1 Liter ( 50 x konsentrasi )

• Timbang Kalium Nitrat ( KNO3 ) 95 gram, masukkan ke dalam gelas piala dan larutkan dengan aquadest kira-kira 700 ml, aduk hingga larut sempurna.
• Pindahkan ke dalam labu takar dan tambah aquadest sampai tanda batas. Gojog hingga homogen.
• Larutan yang sudah jadi dipindahkan ke dalam botol reagen dan beri label Stok B.
• Larutan ini mengandung 95 mg/ml  KNO3
• Untuk membuat 1 liter medium MS diperlukan 20 ml stok B.

C. Larutan Stok C, 1 Liter ( 100 x konsentrasi )

• Timbang CaCl2.2H2O 44 gram, kemudian larutkan dengan aquadest 700 ml dalam gelas piala. Aduk hingga larut.
• Tuang larutan tersebut ke dalam labu takar dan tambahkan aquadest sampai tanda batas.
• Pindahkan larutan ke dalam botol reagen dan beri label Stok C.
• Larutan ini mengandung 44mg/ml CaCl2.2H2O
• Untuk membuat 1 liter medium MS diperlukan 10 ml stok C. 

D. Larutan Stok D, 1 Liter ( 100 x konsentrasi )

• Timbang MgSO4.7 H2O 37 gram dan KH2PO4 17 gram, larutkan secara terpisah dengan masing-masing 350 ml aquadest.
• Setelah larut, tuang kedua larutan tersebut ke dalam labu takar 1 liter dan tambahkan aquadest sampai tanda batas. Gojog hingga homogen.
• Pindahkan larutan yang sudah jadi ke dalam botol reagen, tutup rapat dan beri label Stok D.
• Larutan ini mengandung 37 mg/ml MgSO4.H2O dan 17 mg/ml KH2PO4.
• Untuk membuat 1 liter medium MS diperlukan 10 ml stok D.

E. Larutan Stok E, 1 Liter ( 200 x konsentrasi )

• Timbang FeSO4.7H2O 5,57 gram dan Na2EDTA 7,45 gram. larutkan secara terpisah.
• Larutkan FeSO4.7H2O dengan aquadest kira-kira 100 ml, tambahkan dengan 1-2 tetes H2SO4 pekat.
• Larutkan Na2EDTA dengan aquadest 100 ml dan dipanaskan pada suhu 40 - 60 °C selama beberapa menit, kemudian tambah larutan FeSO4.7H2O. Aduk hingga larut sempurna. Biarkan dingin.
• Tuang larutan tersebut ke dalam labu takar 1 liter, tambahkan aquadest sampai tanda batas.
• Pindahkan ke dalam botol reagen dan beri label Stok E.
• Larutan stok ini disimpan dalam keadaan kedap cahaya dengan cara membungkus botol dengan aluminium foil karena cahaya dapat merusak Fe.
• Larutan ini mengandung 5,57 mg/ml FeSO4.7H2O dan 7,45 mg/ml Na2EDTA.
• Untuk membuat 1 liter medium MS dibutuhkan 5 ml stok E.

F. Larutan Stok F, 1 Liter ( 200 x konsentrasi )

• Timbang MnSO4.H2O 3,380 gram. ZnSO4.7H2O 1,720 gram. H3BO3 1,240 gram. KI 0,165 gram. CuSO4.5H2O 0,005 gram. Na2MO.2H2O 0,05 gram. COCl2.2H2O 0,005 gram.
• Masukkan bahan satu persatu sampai larut ke dalam gelas piala yang berisi 700 ml aquadest. Aduk hingga larut.
• Tuang larutan ke dalam labu takar dan tambahkan aquadest sampai tanda batas. Gojog hingga homogen.
• Pindahkan larutan ke dalam botol reagen, tutup rapat, dan beri label Stok F.
• Untuk membuat 1 liter medium MS dibutuhkan 5 ml stok F.

G. Larutan Stok G ( Vitamin ), 100 ml ( 1000 x konsentrasi )

• Timbang Thiamin-HCl 0,01 gram. Nicotinic Acid 0,05 gram. Pyridoxin-HCl 0,05 gram. Glycine 0,2 gram.
• Masukkan semua bahan ke dalam gelas piala dan tambahkan aquadest kira-kira 50 ml. Aduk hingga larut.
• Tuang larutan ke dalam labu takar 100 ml dan tambah aquadest sampai tanda batas.
• Pindahkan ke dalam botol reagen dan beri label Stok G.
• Untuk membuat 1 liter medium MS dibutuhkan 1 ml stok F.

Kebutuhan larutan stok untuk membuat media MS dalam 1 liter bisa dilihat pada tabel berikut :

REFERENSI

Daisy P. Sriyanti Hendaryono dan Ari Wijayani, 1994.Teknik Kultur Jaringan : Pengenalan dan Petunjuk Perbanyakan Tanaman Secara Vegetatif Modern. Kanisius. Yogyakarta.