Penentuan Gula Reduksi Secara Spektrofotometer ( Metode Nelson - Somogy )

Jagad Kimia Thursday, October 25, 2018

Sebagian karbohidrat bersifat gula reduksi. Sifat gula pereduksi ini disebabkan adanya gugus aldehid dan gugus keton yang bebas, sehingga dapat mereduksi ion - ion logam.
Gula reduksi merupakan gula ( karbohidrat ) yang dapat mereduksi senyawa - senyawa penerima elektron.
Contoh gula reduksi adalah glukosa, laktosa, fruktosa, maltosa, dan manosa. Sedangkan contoh gula non reduksi adalah sukrosa.

Penentuan Gula Reduksi Secara Spektrofotometer ( Metode Nelson - Somogy )

Alat :

Timbangan analitik
Spektrofotometer UV-Vis
Waterbath
Tabung reaksi vol 15 ml
Pipet ukur 1 ml dan 10 ml
Gelas beker 100 ml
Labu ukur 100 ml
Erlenmeyer 100 ml

Bahan/ Pereaksi :

Glukosa anhidrat ( sebagai standar )
Larutan Arsenomolybdat
Nelson A
Nelson B
Aquadest

>> Membuat Larutan Glukosa Standar

Timbang glukosa anhidrat sebanyak 10 mg dan larutkan dengan aquadest sampai volume 100 ml ( 10 mg glukosa anhidrat/100 ml )

>> Membuat Larutan Arsenomolybdat

- Timbang 25 gram ammonium molybdat dan larutkan dalam 450 ml aquadest. Tambahkan 25 ml asam sulfat (H2SO4) pekat ( Larutan A ).

- Pada wadah yang lain timbang 3 gram sodium hydrogen arsenate heptahydrat ( Na2HASO4.7H2O ) dan larutkan dengan 25 ml aquadest. Kemudian tuang larutan ini ke dalam larutan A.

Simpan dalam botol berwarna coklat dan diinkubasi pada suhu 37 °C selama 24 jam. Reagen ini berwarna kuning.

>> Membuat Larutan Nelson

Nelson A : Timbang 12,5 gram natrium karbonat anhidrat, 12,5 garam Rochelle ( Natrium Kalium Tartrat ), 10 gram natrium bikarbonat dan 100 gram natrium sulfat anhidrat, larutkan dengan aquadest dan jadikan sampai volume 500 ml.

Nelson B : Timbang 7,5 gram CuSO4.5H2O dan larutkan dalam 50 ml aquadest. Tambahkan 1 tetes asam sulfat pekat.

Larutan Nelson dibuat dengan mencampur 25 ml Nelson A dengan 1 ml Nelson B ( A : B = 25 :1 ). Pencampuran dikerjakan pada saat akan digunakan.

>> Membuat Deret Standar
Dipipet standar glukosa dan aquadest hingga jumlah volume masing-masing deret standar 1 ml

No	Standar glukosa	aquadest	total
	(ml)	(ml)	(ml)
1	0	1	1
2	0,2	0,8	1
3	0,4	0,6	1
4	0,6	0,4	1
5	0,8	0,2	1
6	1,0	0	1

Cara Kerja :

Timbang sampel sebanyak 0,5 - 1,0 gram (tergantung jenis sampel atau sampel yang mempunyai kadar gula reduksi sekitar 2 - 8 mg/100 ml ) ke dalam erlenmeyer 100 ml.
Tambahkan aquadest kemudian encerkan hingga volume 100 ml dengan menggunakan labu takar.
Sentrifuse / saring sampel dengan menggunakan kertas saring sehingga didapat filtrat jernih.
Pipet 1 ml filtrat jernih dan bersama deret standar tambahkan masing-masing ke dalam tabung 1 ml reagen nelson.
Panaskan semua tabung pada penangas air mendidih selama 20 menit.
Ambil semua tabung dan segera didinginkan bersama-sama dalam gelas piala yang berisi air dingin sehingga suhu tabung mencapai 25 °C.
Setelah dingin tambahkan 1 ml larutan arsenomolybdat, gojog sampai semua endapan Cu2O yang ada larut kembali.
Tambahkan aquadest 7 ml dan gojog hingga homogen.
Vortex larutan dan baca absorbansinya menggunakan spektrofotometer pada panjang gelombang 540 nm.
Catat data yang diperoleh.

Perhitungan :

contoh pembacaan kurva standar

No	Standar glukosa	Konsentrasi glukosa mg/ml	Absorbansi λ = 540 nm
1	0	0	0
2	0,2	0,02	0,134
3	0,4	0,04	0,236
4	0,6	0,06	0,328
5	0,8	0,08	0,460
6	1,0	0,1	0,524

Cara Membuat Grafik : Cara Membuat Grafik Kurva Standar

Dari grafik diatas didapatkan persamaan y = 5.2714x + 0.0168 ( R2 = 0.993)

Di dapat data untuk menghitung gula reduksi

No	Kode sampel	Massa (gr)	Pembacaan sampel		Gula reduksi
			y	x	%
		diketahui	diketahui	dihitung	dihitung

x (mg/ml kurva ) = ( y - 0.0168 ) / 5.2714

x = ....(diketahui)

Rumus Gula Reduksi

Keterangan :

mg/ml kurva = kadar sampel yang didapat dari kurva hubungan antara kadar deret standar dengan pembacaannya setelah dikoreksi blanko

fp = faktor pengenceran

100 = konversi ke persen

DAFTAR ACUAN